环保之家讯：原代细胞无血清培养技术
拜力生物编辑整理：1、弃去培养基废液。2、消化：加入1ml 0.125％胰酶溶液，转动培养瓶使酶液浸没瓶底，温浴消化2-3分钟。3、终止：用无血清培养基终止酶反应。4、离心：收集中和了的培养液，于15ml 的离心管中 1000rmp 离心10分钟。5、细胞重悬：弃去上清，加入1ml 无血清培养基用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液。6、细胞计数：血球计数板计数细胞，并换算出细胞数量。7、接种分瓶： 将细胞接种到含4ml无血清培养基的培养瓶中，37℃，5% CO2培养箱中培养。8、镜检观察：次日观察贴壁率，细胞形态等。原代细胞培养技术一、组织块直接培养法1、取材，用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。2、用手术剪将组织剪切成1mm3左右的小块，再用Hank’s液洗三次。3、将组织块转移至培养瓶，并贴附于瓶底面。4、轻轻将培养瓶翻转，瓶底朝上，向瓶内注入适量的培养液，将培养瓶放置在37℃恒温箱内培养。5、放置待组织小块贴附后，将培养瓶慢慢翻转平放，使组织浸入培养液中(勿使组织漂起)，37℃继续培养。二、消化培养法1、取材，用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。2、用手术剪将组织剪切成1mm3左右的小块，再用Hank’s液洗三次。3、视组织块量加入酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。4、加入3—5ml培养液以终止酶消化作用(或加入相关酶抑制剂)。5、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。6、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。7、加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。8、加入培养液1—2ml(视细胞量)，血球计数板计数。9、将细胞转移到培养瓶中，37℃下培养。三、 器官培养1、将不锈网做成支架形状，调整其高度至培养皿的1/2深度平面，在其表面放置0.5μm孔径滤膜。2、将培养液加入培养皿中，使液面刚刚接触到滤膜，但不要使其浮起。3、将要培养器官组织放在滤膜上，一般厚度不要超过200μm，水平面积不超过10mm2。4、将上述准备好的培养物放入CO2培养箱，并加注氧气调整氧分压，最好到90%。5、培养过程中要注意观察培养液平面，尽可能保持在与滤膜一致的水平上。6、上述可进行器官培养1-3周，每2-3天换液一次，并根据情况做进一步实验和检测。环保之家为您提供最全面的环保,环保用品,净化,空气净化,环保净化品牌的装修知识点和各种环保净化的导购与在线购买服务,拥有最便宜的环保净化价格和最优质的售后服务,每天都有秒杀的抢购活动哦！敬请登陆环保之家：http://huanbao.jc68.com/
